賽默飛Thermo實時熒光定量PCR儀 CFX96 全面介紹

實時熒光定量PCR（Quantitative Polymerase Chain Reaction, qPCR）是一種基于熒光信號檢測的分子生物學技術(shù)，用于實時監(jiān)測和定量分析DNA或RNA擴增過程。賽默飛（Thermo Fisher Scientific）作為生命科學技術(shù)公司，其CFX96實時熒光定量PCR儀以高靈敏度、高準確性和靈活性廣受認可，是一款適用于科研、臨床診斷以及工業(yè)應(yīng)用的高性能儀器。本文將從CFX96的特點、技術(shù)參數(shù)、操作流程及應(yīng)用領(lǐng)域等方面，全面介紹這一儀器。

一、儀器概述

賽默飛CFX96實時熒光定量PCR儀是一款以96孔板為基礎(chǔ)的高通量、高靈敏度的qPCR儀器。CFX96專為滿足基因檢測、表達分析、病原體檢測、基因分型及突變研究等多種實驗需求而設(shè)計。其核心特點是擁有強大的光學檢測系統(tǒng)、快速高效的溫控系統(tǒng)以及直觀易用的軟件支持，為用戶提供了靈活的實驗方案和可靠的數(shù)據(jù)支持。

CFX96兼容多種熒光標記體系（如SYBR Green、TaqMan探針等），具有開放式平臺設(shè)計，適應(yīng)性強。儀器通過精準的熒光信號檢測實現(xiàn)對樣品擴增過程的實時監(jiān)控，為科學研究提供精準的實驗數(shù)據(jù)。

二、主要特點

1. 多通道光學系統(tǒng)

CFX96配備了先進的5通道光學檢測系統(tǒng)，可同時監(jiān)測多達5種熒光信號。這種多通道設(shè)計支持多靶標檢測，使得單次實驗?zāi)軌驒z測多種基因，為基因表達研究和復雜分子診斷提供了強大的工具。

2. 高靈敏度和寬動態(tài)范圍

CFX96采用高性能光學檢測模塊，能夠檢測低至單拷貝的DNA或RNA，靈敏度。同時，其寬動態(tài)范圍允許從高濃度到低濃度樣品的準確定量分析，確保實驗數(shù)據(jù)的準確性和重復性。

3. 快速高效的溫控系統(tǒng)

CFX96使用Peltier加熱模塊，提供了快速升降溫的能力，使PCR反應(yīng)更高效。其溫控均一性可達±0.2℃，在樣品間提供一致的擴增條件，確保數(shù)據(jù)的可靠性。

4. 靈活的試劑兼容性

CFX96是一款開放式平臺，支持多種試劑體系，如SYBR Green染料、TaqMan探針和分子信標等。用戶可以根據(jù)實驗需求選擇適合的試劑和耗材，降低實驗成本，同時提高實驗設(shè)計的靈活性。

5. 用戶友好的軟件系統(tǒng)

CFX96配備了強大的配套軟件，支持以下功能：

• 絕對定量：通過標準曲線法確定未知樣品的濃度；

• 相對定量：分析不同條件下目標基因的表達變化；

• 基因分型：區(qū)分不同基因型；

• 熔解曲線分析：用于區(qū)分特異性擴增和非特異性擴增產(chǎn)物；

• 突變分析：用于基因突變位點檢測。

軟件界面簡潔直觀，實驗設(shè)置和數(shù)據(jù)分析功能豐富，降低了用戶的操作難度。此外，軟件支持實驗報告自動生成和多種數(shù)據(jù)導出格式，便于實驗結(jié)果分享和歸檔。

6. 高通量能力

CFX96支持96孔板格式，適合中高通量實驗需求。其快速PCR模式可顯著縮短實驗時間，為時間緊迫的實驗提供了解決方案。

7. 緊湊設(shè)計與多功能性

CFX96設(shè)計緊湊，占用實驗室空間小，適合各類實驗室環(huán)境。其靈活性和多功能性使其在科研和應(yīng)用實驗中都表現(xiàn)出色。

三、技術(shù)參數(shù)

1. 光學性能

• 光學系統(tǒng)：5通道獨立光學檢測；

• 熒光染料：支持SYBR Green、FAM、HEX、VIC、ROX、Texas Red、Cy5等多種熒光標記；

• 動態(tài)范圍：可檢測10個數(shù)量級；

• 靈敏度：單拷貝靶標檢測。

2. 溫控性能

• 樣品模塊：96孔板；

• 溫控范圍：4℃至99.9℃；

• 溫控均一性：±0.2℃；

• 升降溫速度：最高可達5℃/秒。

3. 數(shù)據(jù)分析

• 分析功能：支持標準曲線繪制、Ct值計算、熔解曲線分析、基因分型等；

• 導出格式：兼容.xlsx、.txt、.pdf等多種格式。

4. 兼容性

• 試劑：支持多種熒光染料和探針試劑；

• 耗材：適配標準96孔板及PCR管。

5. 尺寸與重量

• 儀器尺寸：約33 cm × 50 cm × 50 cm；

• 重量：約30 kg。

四、操作流程

1. 樣品制備

從實驗材料（如組織、血液、細胞）中提取DNA或RNA，通過逆轉(zhuǎn)錄將RNA轉(zhuǎn)化為cDNA（若為RNA樣品）。配置PCR反應(yīng)體系，包括引物、探針或熒光染料、反應(yīng)緩沖液及模板DNA或cDNA。

2. 儀器設(shè)置

• 打開CFX96儀器，啟動軟件；

• 根據(jù)實驗設(shè)計選擇檢測模式（SYBR Green、TaqMan探針等）；

• 配置擴增程序，包括退火溫度、循環(huán)次數(shù)等；

• 分配熒光通道和目標基因信息。

3. 實驗運行

將樣品加載至96孔板中并密封，將樣品板放入儀器中，啟動實驗程序。CFX96將實時監(jiān)測擴增過程并記錄熒光信號。

4. 數(shù)據(jù)分析

實驗完成后，軟件自動生成擴增曲線、Ct值和熔解曲線等實驗結(jié)果。用戶可以進一步分析數(shù)據(jù)，并根據(jù)實驗需求導出或保存結(jié)果。

五、應(yīng)用領(lǐng)域

CFX96實時熒光定量PCR儀因其高靈敏度、多功能性和靈活性，被廣泛應(yīng)用于以下領(lǐng)域：

1. 基因表達研究

利用相對定量方法，研究目標基因在不同條件下的表達水平，為基因功能研究和生物學機制探索提供數(shù)據(jù)支持。

2. 病原體檢測

檢測和定量分析微生物、病毒和其他病原體的核酸，廣泛應(yīng)用于傳染病診斷、食品安全檢測及環(huán)境監(jiān)測。

3. 基因分型

通過熒光信號區(qū)分不同基因型，應(yīng)用于個體化醫(yī)療、遺傳病篩查和藥物基因組學研究。

4. 突變分析

檢測單核苷酸多態(tài)性（SNP）和基因突變，用于癌癥研究、藥物開發(fā)及精準醫(yī)療。

5. 分子診斷

CFX96在遺傳性疾病檢測、腫瘤標志物分析和藥物靶點研究中具有重要作用，為分子診斷領(lǐng)域提供技術(shù)支持。

6. 藥物研發(fā)

支持高通量基因表達篩選和藥物毒理學研究，用于分析藥物對基因表達的影響和潛在靶點的篩選。

六、優(yōu)勢總結(jié)

1. 高性能光學系統(tǒng)：CFX96支持多通道實時檢測，提供精確可靠的數(shù)據(jù)。

2. 靈活開放的設(shè)計：兼容多種試劑和耗材，適應(yīng)不同實驗需求。

3. 高通量能力：96孔板設(shè)計適合中高通量實驗，支持快速模式。

4. 用戶友好軟件：操作簡單，數(shù)據(jù)分析功能強大，適合不同層次用戶。

5. 廣泛應(yīng)用領(lǐng)域：涵蓋基礎(chǔ)研究、臨床診斷及工業(yè)應(yīng)用。

七、總結(jié)

賽默飛CFX96實時熒光定量PCR儀是一款高性能、多功能、靈活的qPCR儀器，適用于多種分子生物學研究和臨床診斷需求。其先進的光學檢測技術(shù)、高靈敏度、寬動態(tài)范圍和高通量實驗?zāi)芰?，使其成為基因檢測、病原體分析和精準醫(yī)療研究的理想選擇。CFX96不僅能滿足現(xiàn)代科研對高精度數(shù)據(jù)的需求，也能在未來的分子診斷和生物技術(shù)開發(fā)中繼續(xù)發(fā)揮重要作用，為推動科學進步提供強有力的支持。