賽默飛7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（Applied Biosystems 7500）介紹

一、概述

賽默飛（Thermo Fisher Scientific）旗下的Applied Biosystems 7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（7500 Real-Time PCR System）是一款高性能的實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）儀器。它被廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、病原檢測(cè)、突變檢測(cè)、基因拷貝數(shù)分析等多個(gè)分子生物學(xué)研究和臨床檢測(cè)領(lǐng)域。7500型PCR儀結(jié)合精確的光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)、智能化數(shù)據(jù)分析軟件和穩(wěn)定的溫控系統(tǒng)，可提供高靈敏度和高通量的qPCR檢測(cè)，滿足科研、醫(yī)療及工業(yè)實(shí)驗(yàn)室的需求。

二、主要特點(diǎn)

7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀在光學(xué)系統(tǒng)、檢測(cè)通道、數(shù)據(jù)分析等方面具有明顯的優(yōu)勢(shì)，適用于各種PCR實(shí)驗(yàn)。

1. 高精度光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)

• 優(yōu)化的光學(xué)設(shè)計(jì)，能夠準(zhǔn)確采集熒光信號(hào)，提高檢測(cè)靈敏度。

• 支持多種熒光檢測(cè)方式，兼容SYBR Green染料和TaqMan探針技術(shù)。

• 快速數(shù)據(jù)采集，提高擴(kuò)增曲線的準(zhǔn)確性，確保數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性。

2. 靈活的熒光檢測(cè)通道

• 支持5個(gè)熒光通道，能夠進(jìn)行多重PCR實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)基因。

• 兼容多種熒光染料（FAM™、VIC®、ROX™、SYBR® Green等），適用于不同類型的實(shí)驗(yàn)。

3. 精確的溫控系統(tǒng)

• 高效的Peltier熱循環(huán)系統(tǒng)，確保樣品孔間溫度均一性，提高擴(kuò)增的重復(fù)性和可靠性。

• 快速升降溫，縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間，提高工作效率。

4. 強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析軟件

• Applied Biosystems專用軟件，支持標(biāo)準(zhǔn)曲線分析、相對(duì)定量分析（2-ΔΔCt方法）、絕對(duì)定量分析等數(shù)據(jù)處理功能。

• 直觀的用戶界面，可自動(dòng)計(jì)算Ct值、熔解曲線分析，支持導(dǎo)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

5. 兼容多種樣本板型

• 支持96孔板，適用于中等通量實(shí)驗(yàn)需求。

• 兼容各種PCR反應(yīng)體系，包括TaqMan探針?lè)?、SYBR Green熒光染料法。

6. 可靠的實(shí)驗(yàn)重復(fù)性

• 通過(guò)優(yōu)化的檢測(cè)和溫控系統(tǒng)，保證數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性和重復(fù)性，適用于科研實(shí)驗(yàn)、臨床診斷、環(huán)境檢測(cè)等領(lǐng)域。

三、技術(shù)規(guī)格

四、適用領(lǐng)域

1. 基因表達(dá)分析

• 通過(guò)實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)特定基因的表達(dá)水平，適用于生物醫(yī)學(xué)研究、藥物研發(fā)等領(lǐng)域。

• 可使用SYBR Green染料法或TaqMan探針?lè)ㄟM(jìn)行高靈敏度的基因表達(dá)定量分析。

2. 病原體檢測(cè)

• 7500型PCR儀可檢測(cè)細(xì)菌、病毒（如SARS-CoV-2、流感病毒、HIV等），適用于傳染病檢測(cè)。

• 高靈敏度檢測(cè)可確保低拷貝病原DNA/RNA的可靠檢測(cè)。

3. 突變檢測(cè)與基因分型

• 適用于SNP（單核苷酸多態(tài)性）分析、點(diǎn)突變檢測(cè)、腫瘤基因突變研究等。

• 結(jié)合TaqMan探針技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)高特異性的基因分型分析。

4. 司法鑒定與食品安全

• 適用于DNA指紋鑒定、食品安全檢測(cè)（如轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)）。

• 通過(guò)實(shí)時(shí)PCR技術(shù)，可快速鑒定樣本來(lái)源，提高實(shí)驗(yàn)效率。

五、操作流程

7500型PCR儀的使用流程如下：

1. 樣品準(zhǔn)備

• 提取DNA或RNA，進(jìn)行濃度測(cè)定和純化。

• 選擇合適的PCR反應(yīng)體系（SYBR Green或TaqMan探針）。

• 配制PCR反應(yīng)液，包括引物、探針、dNTPs、PCR緩沖液、熒光染料或探針。

2. 加樣與PCR板準(zhǔn)備

• 將PCR反應(yīng)體系分裝至96孔PCR板，每孔體積通常為10-50 µL。

• 使用封膜密封PCR板，避免交叉污染。

3. 運(yùn)行PCR程序

• 在7500 PCR儀的軟件中創(chuàng)建實(shí)驗(yàn)：

• 設(shè)定PCR反應(yīng)條件（變性、退火、延伸）。

• 選擇熒光通道并設(shè)置數(shù)據(jù)采集模式。

• 啟動(dòng)PCR實(shí)驗(yàn)，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)變化。

4. 數(shù)據(jù)分析

• 通過(guò)儀器自帶的軟件分析Ct值，計(jì)算基因表達(dá)水平或DNA拷貝數(shù)。

• 生成擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行數(shù)據(jù)比對(duì)。

六、數(shù)據(jù)分析

1. Ct值計(jì)算

• **Ct（閾值循環(huán)數(shù)）**表示PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)閾值，Ct值越低，表示初始DNA/RNA濃度越高。

• 用于基因表達(dá)分析、病原體檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)。

2. 絕對(duì)定量分析

• 通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算DNA/RNA拷貝數(shù)，適用于病毒載量檢測(cè)等研究。

3. 相對(duì)定量分析（ΔΔCt法）

• 比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組基因表達(dá)水平，廣泛應(yīng)用于藥物研究、癌癥生物標(biāo)志物分析。

七、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

• 確保樣品純度：DNA/RNA質(zhì)量影響擴(kuò)增效率，應(yīng)避免蛋白或其他雜質(zhì)污染。

• 正確設(shè)置熒光通道：不同的熒光探針需要匹配相應(yīng)的檢測(cè)通道。

• 避免交叉污染：使用無(wú)RNA/DNA酶的移液器和試劑，嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作流程。

• 優(yōu)化引物設(shè)計(jì)：避免二聚體形成，提高PCR特異性和擴(kuò)增效率。

八、總結(jié)

賽默飛7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀憑借高靈敏度的熒光檢測(cè)、精準(zhǔn)的溫控系統(tǒng)、強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析功能，已成為基因組研究、病原檢測(cè)、臨床診斷等領(lǐng)域的常見(jiàn)PCR設(shè)備。其多通道檢測(cè)、兼容多種熒光探針、支持高通量檢測(cè)的特點(diǎn)，使其適用于從基礎(chǔ)研究到應(yīng)用檢測(cè)的各種實(shí)驗(yàn)需求。通過(guò)合理優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，7500型PCR儀能夠提供高精度、穩(wěn)定可靠的PCR定量分析結(jié)果，為科研人員和臨床醫(yī)生提供強(qiáng)有力的實(shí)驗(yàn)支持。