LightCycler 480 II 實(shí)時熒光定量PCR儀（Roche Diagnostics）

一、設(shè)備概述

LightCycler 480 II 是 Roche Diagnostics 研發(fā)的一款高通量、全自動實(shí)時熒光定量PCR（qPCR）儀器。該設(shè)備采用創(chuàng)新的熱循環(huán)技術(shù)，結(jié)合先進(jìn)的熒光檢測系統(tǒng)，能夠顯著提高實(shí)驗(yàn)效率，同時確保高精度和高重復(fù)性的檢測結(jié)果。LightCycler 480 II 適用于基因表達(dá)分析、基因分型、突變檢測、病原體檢測等多種應(yīng)用，特別適合需要高精度定量和大規(guī)模實(shí)驗(yàn)的研究需求。

二、主要特點(diǎn)

1. 高通量支持

LightCycler 480 II 支持 96 孔板和384 孔板兩種格式，滿足不同實(shí)驗(yàn)通量的需求。高通量能力使其特別適用于大規(guī)?；蚝Y選和臨床樣本檢測。

2. 創(chuàng)新的熱循環(huán)技術(shù)

該設(shè)備采用高效的銀合金模塊，確保熱傳遞的均勻性和快速升降溫能力。溫度均勻性對于PCR反應(yīng)的準(zhǔn)確性至關(guān)重要，LightCycler 480 II 通過優(yōu)化熱循環(huán)系統(tǒng)，確保實(shí)驗(yàn)的高精度和重復(fù)性。

3. 多通道熒光檢測

LightCycler 480 II 具備 5 個熒光檢測通道，能夠同時檢測多種熒光染料，包括 SYBR Green、TaqMan 探針等。其靈敏的光學(xué)系統(tǒng)能夠高效檢測熒光信號，使得多重PCR（Multiplex PCR）成為可能，大幅提高實(shí)驗(yàn)效率。

4. 精確的定量分析

LightCycler 480 II 能夠進(jìn)行絕對定量、相對定量、基因分型、溶解曲線分析等實(shí)驗(yàn)，適用于多種研究領(lǐng)域。其強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析軟件支持標(biāo)準(zhǔn)曲線法、ΔΔCt 法等不同定量分析方法，確保數(shù)據(jù)的可靠性。

5. 直觀的軟件界面

配套的 LightCycler 軟件提供直觀的操作界面，可實(shí)現(xiàn)實(shí)時數(shù)據(jù)采集、擴(kuò)增曲線分析、基因分型等功能。該軟件還能自動生成實(shí)驗(yàn)報告，簡化數(shù)據(jù)管理流程。

6. 適應(yīng)不同的實(shí)驗(yàn)需求

LightCycler 480 II 兼容多種熒光探針、染料和 PCR 反應(yīng)體系，能夠靈活適應(yīng)不同的實(shí)驗(yàn)需求，如：

• 基因表達(dá)分析

• 基因分型

• 突變檢測

• 病原體檢測

• 藥物篩選

三、應(yīng)用領(lǐng)域

1. 基因表達(dá)分析

LightCycler 480 II 通過實(shí)時熒光檢測，精準(zhǔn)量化基因表達(dá)水平，適用于研究細(xì)胞信號通路、疾病機(jī)制及藥物作用。

2. 基因分型

該設(shè)備可用于 SNP（單核苷酸多態(tài)性）檢測和等位基因分型，廣泛應(yīng)用于遺傳學(xué)研究和個性化醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。

3. 突變檢測

可用于檢測腫瘤相關(guān)基因突變、病毒變異株等。高靈敏度的熒光檢測系統(tǒng)確保微量突變的準(zhǔn)確識別。

4. 病原體檢測

LightCycler 480 II 可用于檢測病毒、細(xì)菌和其他病原微生物，特別適用于臨床診斷和公共衛(wèi)生監(jiān)測。

5. 藥物篩選

可用于篩選影響基因表達(dá)的候選藥物，評估藥物的作用機(jī)制。

四、操作流程

1. 樣本準(zhǔn)備

• 提取 DNA/RNA

• 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄（如 RNA 需要轉(zhuǎn)錄為 cDNA）

2. PCR 反應(yīng)體系配置

• 添加 PCR 反應(yīng)緩沖液、熒光探針/染料、酶、引物等

• 配置標(biāo)準(zhǔn)曲線（如需要）

3. 裝載樣本

• 使用 96 孔或 384 孔 PCR 板

• 進(jìn)行密封，防止蒸發(fā)

4. 設(shè)置 PCR 程序

• 配置擴(kuò)增步驟，如變性、退火、延伸等

• 選擇檢測通道和數(shù)據(jù)采集模式

5. 運(yùn)行 PCR 反應(yīng)

• 啟動 LightCycler 480 II

• 實(shí)時監(jiān)測熒光信號，記錄擴(kuò)增曲線

6. 數(shù)據(jù)分析

• 生成擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線、Ct 值分析等

• 輸出實(shí)驗(yàn)報告

五、維護(hù)與保養(yǎng)

為了保持 LightCycler 480 II 的最佳性能，建議定期進(jìn)行以下維護(hù)：

1. 清潔光學(xué)組件

• 使用適當(dāng)?shù)那鍧嵢軇┎潦脵z測模塊，避免灰塵影響熒光檢測。

2. 溫控系統(tǒng)校準(zhǔn)

• 定期進(jìn)行溫度均一性測試，確保加熱模塊工作正常。

3. 軟件升級

• 確保 LightCycler 軟件版本最新，以獲得最新的數(shù)據(jù)分析功能。

4. 日常檢查

• 運(yùn)行空白實(shí)驗(yàn)，確保儀器沒有背景熒光污染。

六、技術(shù)參數(shù)一覽

七、總結(jié)

LightCycler 480 II 是一款高通量、高精度的實(shí)時熒光定量 PCR 儀器，特別適用于需要進(jìn)行大規(guī)模樣本分析的實(shí)驗(yàn)室。其先進(jìn)的熱循環(huán)技術(shù)、靈敏的熒光檢測系統(tǒng)和直觀的軟件操作界面，使其成為分子生物學(xué)研究、臨床診斷和藥物篩選等領(lǐng)域的重要工具。無論是基因表達(dá)分析、基因分型，還是病原體檢測，LightCycler 480 II 都能提供可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為科學(xué)研究和醫(yī)療應(yīng)用提供有力支持